1.將樣品放入離心管柱套管中(植物樣品同樣操作)
PS:細胞樣品貼壁細胞可直接在培養(yǎng)容器中操作,懸浮細胞可收集后放入離心管
2.用研磨棒將組織進行研磨(植物樣品同樣操作,細胞樣品跳過此步驟)
3.按照說明書加入與樣品量成比例的裂解液(細胞樣品請計數(shù)或按細胞體積添加)
繼續(xù)研磨幾次可見樣品變得十分粘稠(此為DNA雙鏈完全打開的正,F(xiàn)象,樣品越粘稠說明裂解效率越高),與DNA緊密結合的蛋白也可全部獲取,無蛋白丟失) 細胞樣品跳過此步驟
4.將離心管柱放入離心機中14000rpm,離心30秒
5.取出離心管,將離心管柱棄掉,蛋白樣品制備完成!可直接用BCA法檢測濃度及下游各項應用。
蛋白提取就這么分分鐘結束了!蛋白提取就這么分分鐘結束了!蛋白提取就這么分分鐘結束了!重要的事情說三遍!
效果如何呢?
請看肉眼可見的結果
用BCA法檢測濃度,為了更直觀的讓大家觀看結果,孵育5分鐘后的顏色變化,此時0.5mg/ml和0.25mg/ml的標準品基本還沒有顯色,而我們的樣品稀釋16倍后的顏色已經(jīng)超過1mg/ml。(PS:濃度這么高,下次小伙伴們是不是就可以少做點細胞培養(yǎng),少買培養(yǎng)基,血清,各種器皿....吧啦吧啦,你懂得。
肉眼可見的結果,你還在等什么呢?無需勻漿,無需超高速離心,無蛋白丟失快來體驗柱式法帶來的新樂趣吧!